台式低温高速离心机如何提取与制备蛋白质

台式低温高速离心机是实验室最常见的必备仪器，今天向大家介绍台式低温高速离心机如何提取与制备蛋白质。

蛋白质样品制备

秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等(1986)的方法进行。

100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入1.5ml10%三氯乙酸(丙酮配制，含10mM即0.07%β-巯基乙醇)，混匀，-20℃沉淀1小时，4℃，15000r/min离心15min，弃上清，沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10mMβ-巯基乙醇)，再于-20℃沉淀1小时，同上离心弃上清，(有必要再用80％丙酮(含10mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干。

按每mg干粉加入20μl(可调)UKS液[9.5M尿素，5mM碳酸钾，1.25%SDS，0.5%DTT(二硫苏糖醇)，2%Ampholine(AmershamPharmaciaBiotechInc，pH3.5-10)，6%TritonX-100]，37℃温育30min，期间搅动几次，28度(温度低，高浓度的尿素会让溶液结冰)16000r/min离心15min，离心力越大时间长一点越好！上清即可上样电泳。或者-70度保存。

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植物根中蛋白质的抽取

(1)sample,液氮研磨

(2)装1.5mlcentrifuge用tube

(3)加1MKH2PO4K2HPO4700ul

(4)12000rpm,4度,10-15minite

(5)取上层液，蛋白质就在里面